病毒的雞胚培養(yǎng)

一、目的要求
掌握雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)新城疫病毒的操作技術(shù).
二、器材
1.雞胚 應(yīng)選用健康雞群的受精蛋,接種雞的雞胚應(yīng)無母源抗體,以免影響病毒在胚胎中的增殖.實(shí)驗(yàn)用的雞胚多采用9—10日齡的活胚.
2.接種材料 新城疫I系疫苗
3.各種器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml結(jié)核菌素注射器、41/2號(hào)注射針頭、鑷子、3%碘酊、75%酒精棉球、鉛筆、酒精燈、剪刀、眼科鑷子、滅菌的疫苗瓶、滅菌滴管和固體石蠟等.
三、內(nèi)容和方法
（一）接種前的準(zhǔn)備
1.雞胚的準(zhǔn)備
本實(shí)驗(yàn)選擇9—10日齡的雞胚,在照蛋時(shí)以鉛筆勾劃出氣室,于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)域中,在血管之間的間隙劃上記號(hào),作為接種部位；用0、 1%新潔爾滅把蛋殼搽洗干凈并抹干,再以2%碘酊對(duì)接種部位進(jìn)行消毒,用75%酒精再擦一遍,在接種定位出打孔,氣室向上豎放于蛋架上.
2.病毒接種材料的準(zhǔn)備
要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的,因此為達(dá)到材料無菌的目的,可在每ml接種物質(zhì)中加青霉素和鏈霉素各100—500IU,置室溫中1小時(shí)或冰箱中12—24小時(shí)處理.或經(jīng)濾器除菌.
（二） 接種
絨毛尿囊腔內(nèi)注射：用6號(hào)針頭的1ml注射器吸取新城疫病毒材料,針頭從已打好的小孔中向雞胚方向插入0.5—1cm,注入0.1ml （相當(dāng)0、5羽份）,再加氧化鋅膠布貼封,再加融化的固體石蠟封口,放回孵化箱中進(jìn)行孵化,每天翻蛋兩次,照視一次.24小時(shí)內(nèi)死亡的舍去.
（三）收獲
新城疫I系病毒材料,在接種24—48小時(shí)即可收獲.收獲前應(yīng)將雞胚 置4度冰箱冷藏4小時(shí)或過夜,以免解剖時(shí)血管破裂.碘酒消毒蛋殼,用鑷子去卵殼和尿囊膜,用吸頭吸尿囊液于瓶?jī)?nèi),可收集5-8ml,無菌檢查,冰凍保存.