酶免疫電泳技術(shù)

一，酶免疫電泳技術(shù)的原理

抗原與抗體在瓊脂糖凝膠中電泳時，在堿性緩沖液的條件下，抗原帶負(fù)電，向正極移動。不同分子量或還不同電荷的抗原，在相同條件下，移動距離不等。這些在不同部位的抗原，再與相關(guān)抗體經(jīng)擴散形成免疫沉淀線。酶免疫電泳技術(shù)中的抗原與抗體就是酶和它的相應(yīng)抗體球蛋白。酶抗原與酶抗體形成的免疫復(fù)合物是用底物顯色的，由于酶反應(yīng)的高度靈敏性，使酶免疫電泳技術(shù)成為一項靈敏度高的檢測技術(shù)，但僅局限于酶蛋白的分析鑒定。

二，辣根過氧化物酶（HRP）免疫電泳技術(shù)的程序

1， 器材與設(shè)備

電泳儀（包括電泳槽）；溫箱；載玻片（7.5cm×2.5cm）;小玻棒（長4cm左右，直徑約1.5mm）；打孔器；鋪有濕紗布的帶蓋搪瓷盒。

2， 材料與試劑

感染病毒的植物病葉，健株葉片作對照；辣根過氧化物酶（精制）制備的兔抗酶抗體；瓊脂糖；0.1mol/pH8.6巴比妥鈉鹽酸緩沖液；底物與供氫體混合液（H2O2和DAB-4HC1）。

3，實驗程序

（1）將小玻棒放在潔凈的載玻片中央，然后將3ml溶化的瓊脂糖溶液（0.8g瓊脂糖/100ml巴比妥鈉鹽酸緩沖液）澆制其上，待冷凝后，用針尖挑去玻棒，中央出現(xiàn)一穴槽。

（2）在穴槽一端的兩側(cè)近邊沿2mm處各打一小孔（直徑2－3mm）,在一孔穴中加入健株葉片汁液，在另一孔穴加入感染病毒的植株葉片汁液。

（3）加汁液的孔穴一端接負(fù)極，電泳緩沖液仍是0.1mol/LpH8.6巴比妥鈉鹽酸緩沖液，電壓150V，電泳1h。

（4）在穴槽加入抗HRP兔血清，置于濕盒中，在37℃溫箱中反應(yīng)3h左右或室溫過夜。

（5）在生理鹽水中浸洗3－4天，每天換水3次。

（6） 敷上干凈的濕濾紙，置于40℃烘箱內(nèi)烘干。

（7）浸入底物顯色，從沉淀弧的形狀，部位不同，比較健，病汁液所形成的沉淀線。