選擇ELISA試劑盒的小秘籍

    為什么選擇ELISA試劑盒？
    以TNF-a為例，Meso Scale Discovery? Vplex電化學發(fā)光試劑盒以0.04pg/mL的靈敏度是普通ELISA（7 pg/mL左右）的100多倍。如果實驗樣本中的TNF-a低于7pg/mL,這就意味著實驗數(shù)據(jù)會無法檢測，實驗沒有定量結(jié)論。另外一個案例，臨床常規(guī)測定普通CRP的方法檢測線性一般為3~200mg/L，而預測心血管事需要更高靈敏度的CRP，超敏或高敏CRP （hs-CRP）。
    ELISA試劑盒檢測什么樣本？試驗周期多長？
    1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
    2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
    3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
    4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
    5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
    6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融.
    7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
    如實驗研究周期較長，ELISA試劑盒盡量選擇一個批次的，以防止不同批次間的差異。然而由于普通ELISA有效期在3-12個月，而實驗周期往往在1-2年以上，一些長期臨床實驗項目甚至在5-10年，因而經(jīng)常面臨不同批次的挑戰(zhàn)。而Meso Scale Discovery?Vplex試劑盒經(jīng)過54個月穩(wěn)定性測試。