選擇ELISA試劑盒的小秘籍

    為什么選擇ELISA試劑盒？
    以TNF-a為例，Meso Scale Discovery? Vplex電化學(xué)發(fā)光試劑盒以0.04pg/mL的靈敏度是普通ELISA（7 pg/mL左右）的100多倍。如果實(shí)驗(yàn)樣本中的TNF-a低于7pg/mL,這就意味著實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)會(huì)無(wú)法檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)沒(méi)有定量結(jié)論。另外一個(gè)案例，臨床常規(guī)測(cè)定普通CRP的方法檢測(cè)線性一般為3~200mg/L，而預(yù)測(cè)心血管事需要更高靈敏度的CRP，超敏或高敏CRP （hs-CRP）。
    ELISA試劑盒檢測(cè)什么樣本？試驗(yàn)周期多長(zhǎng)？
    1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
    2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
    3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
    4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
    5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
    6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
    7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
    如實(shí)驗(yàn)研究周期較長(zhǎng)，ELISA試劑盒盡量選擇一個(gè)批次的，以防止不同批次間的差異。然而由于普通ELISA有效期在3-12個(gè)月，而實(shí)驗(yàn)周期往往在1-2年以上，一些長(zhǎng)期臨床實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目甚至在5-10年，因而經(jīng)常面臨不同批次的挑戰(zhàn)。而Meso Scale Discovery?Vplex試劑盒經(jīng)過(guò)54個(gè)月穩(wěn)定性測(cè)試。