影響ELISA結(jié)果的因素有哪些？

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是目前臨床上zui常用的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法，由于其試劑穩(wěn)定，易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀，既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)，又可用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測等領(lǐng)域。那么你知道影響ELISA結(jié)果的因素有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！

一、樣品

樣品是檢測的前提，樣品質(zhì)量會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？梢杂肊LISA來檢測的樣品很多，根據(jù)檢測項(xiàng)目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣品，應(yīng)避免溶血，溶血可能會增加非特異性顯色，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。

血清樣品的反復(fù)凍融會使血清中的抗體效價(jià)下降，所以需要多次檢測的血清樣品，如在5d內(nèi)檢測完，可4℃保存，如需長時(shí)間檢測，可進(jìn)行分裝凍存。樣品如被細(xì)菌污染腐敗，可能會導(dǎo)致假陽性。

二、溫度

溫度主要影響抗原抗體反應(yīng)，酶促反應(yīng)速度及非特異性吸附，溫度升高可使抗原抗體結(jié)合反應(yīng)加速，但也易引起抗原抗體復(fù)合物的解離。酶促反應(yīng)速度同樣隨溫度升高而增快，但是酶蛋白變性也加快，喪失酶學(xué)活性，降低酶的有效濃度而減慢反應(yīng)速度，溫度低時(shí)以前者為主，高時(shí)以后者為主。

溫度是質(zhì)量控制的一個(gè)重要方面，一般允許±1℃的誤差。最好水浴，微孔板浮在水面，使溫度迅速平衡。如放溫箱內(nèi)溫育，微孔板不應(yīng)疊置，為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，盛放微孔板的濕盒應(yīng)是金屬的，傳熱容易。空濕盒應(yīng)預(yù)先放在溫箱中，以平衡溫度，在室溫較低時(shí)更需要。

三、時(shí)間

在溫度保證的前提下，時(shí)間的控制至關(guān)重要，尤其是底物顯色的時(shí)間控制，顯色時(shí)間不足或過長會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不成立，無法對檢測結(jié)果進(jìn)行判斷。

加人標(biāo)本、試劑及混合的時(shí)間稱為操作時(shí)差。操作時(shí)差在每個(gè)試驗(yàn)中都存在，對結(jié)果或多或少有影響。對手工操作，尤其是樣品量大的項(xiàng)目，從加人第一個(gè)標(biāo)本到最后一個(gè)標(biāo)本，需幾十分鐘，加人試劑及混勻存在很大的時(shí)間差異，使抗原抗體和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致，易產(chǎn)生假陽性、假陰性結(jié)果。

因此，樣品過多時(shí)，請選擇分批操作，對勿須更換移液口吸嘴的酶結(jié)合物，底物的加樣可選擇8聯(lián)或12聯(lián)專用的多道加液器。亦可避免單孔滴加底物時(shí)遺漏多加。

四、試劑

試劑盒要根據(jù)要求進(jìn)行保存，并保證在有效期內(nèi)使用，使用前應(yīng)平衡到室溫。新購入的試劑盒要進(jìn)行校驗(yàn)，檢查實(shí)驗(yàn)是否成立，不同的試劑盒或不同批號的試劑不可混用。

五、其他

封板膜封閉不嚴(yán)或開啟時(shí)孔內(nèi)液體蒸發(fā)、震出可導(dǎo)致各孔相互污染；操作時(shí)接觸到ELISA板底導(dǎo)致透光度改變，影響酶標(biāo)儀測量結(jié)果；

加樣圖省事，未認(rèn)真更換移液器吸頭，認(rèn)為其帶入標(biāo)本殘留量小，不易影響結(jié)果，是部分檢測人員常有的心理。因此加標(biāo)本時(shí)必須認(rèn)真更換移移液器吸頭，防止移液器吸頭殘留痕量產(chǎn)生假陽性結(jié)果。加樣時(shí)應(yīng)防止濺出污染其它標(biāo)本。